miRNA通過堿基互補配對的方式識別靶基因的3'UTR區(qū)，并根據(jù)互補程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。因此，可以將目的基因的3'UTR區(qū)域構(gòu)建到含luciferase的報告基因質(zhì)粒上，和miRNA mimics/inhibitors以及海腎內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，通過檢測熒光值的變化，判斷miRNA對靶基因的作用。再通過對3'UTR區(qū)進行定點突變的方法進一步確定miRNA與靶基因3'UTR的作用位點。miRNA對靶基因功能的調(diào)控是當(dāng)前研究的熱點。通過利用熒光素酶報告基因檢測實驗尋找或驗證miRNA對靶基因的調(diào)控作用是當(dāng)前最常用的技術(shù)。
常用載體：PGL3-CMV-LUC-MCS
雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)具有如下特點：
（1）靈敏度高、動態(tài)范圍廣、應(yīng)用靈活；
（2）轉(zhuǎn)錄后無需翻譯即具有生物活性；
（3）實驗中報告基因和對照基因的酶沒有種源同源性；
（4）螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中不存在交叉干擾。
miRNA與靶基因相互作用研究主要包含：
（1）miRNA與靶基因結(jié)合驗證：驗證miRNA與靶基因（mRNA，lncRNA,circRNA）結(jié)合作用；
（2）ceRNA作用研究：驗證不同把好基因?qū)iRNA的競爭性結(jié)合作用。
miRNA與mRNA 3'UTR報告基因原理示意圖
（1）吉滿生物可根據(jù)客戶需求提供實驗方案，評估項目可行性，提供一站式服務(wù)；
（2）吉滿生物具有豐富的分子克隆報告基因檢測經(jīng)驗，可快速獲得結(jié)果，周期較短。
miRNA通過堿基互補配對的方式識別靶基因的3'UTR區(qū)，并根據(jù)互補程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。因此，可以將目的基因的3'UTR區(qū)域構(gòu)建到含luciferase的報告基因質(zhì)粒上，和miRNA mimics/inhibitors以及海腎內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，通過檢測熒光值的變化，判斷miRNA對靶基因的作用。再通過對3'UTR區(qū)進行定點突變的方法進一步確定miRNA與靶基因3'UTR的作用位點。miRNA對靶基因功能的調(diào)控是當(dāng)前研究的熱點。通過利用熒光素酶報告基因檢測實驗尋找或驗證miRNA對靶基因的調(diào)控作用是當(dāng)前最常用的技術(shù)。
常用載體：PGL3-CMV-LUC-MCS
雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)具有如下特點：
（1）靈敏度高、動態(tài)范圍廣、應(yīng)用靈活；
（2）轉(zhuǎn)錄后無需翻譯即具有生物活性；
（3）實驗中報告基因和對照基因的酶沒有種源同源性；
（4）螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中不存在交叉干擾。
miRNA與靶基因相互作用研究主要包含：
（1）miRNA與靶基因結(jié)合驗證：驗證miRNA與靶基因（mRNA，lncRNA,circRNA）結(jié)合作用；
（2）ceRNA作用研究：驗證不同把好基因?qū)iRNA的競爭性結(jié)合作用。
miRNA與mRNA 3'UTR報告基因原理示意圖
（1）吉滿生物可根據(jù)客戶需求提供實驗方案，評估項目可行性，提供一站式服務(wù)；
（2）吉滿生物具有豐富的分子克隆報告基因檢測經(jīng)驗，可快速獲得結(jié)果，周期較短。
