1.內(nèi)參抗體
在 Western Blot 實驗中，可能存在總蛋白濃度測定不準(zhǔn)確，或者蛋白質(zhì)樣品上樣時因為操作等產(chǎn)生誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參含量來進(jìn)行校正。
內(nèi)部參照即選取相同樣本中某個內(nèi)源表達(dá)的蛋白作為參照。通常會選擇由管家基因編碼的蛋白 (Housekeeping Proteins) 作為內(nèi)參，它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化可以作為一個穩(wěn)定的參照物 ( 比如 GAPDH、β-Actin 等 )。
在 WB 實驗中，蛋白的表達(dá)情況是通過與抗體的結(jié)合而體現(xiàn)的，也就是說內(nèi)參蛋白的選擇問題等同于內(nèi)參抗體的選擇問題。
2.標(biāo)簽抗體
在生物技術(shù)中，人們常利用 DNA 重組技術(shù)構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，即標(biāo)簽融合蛋白，再利用能特異性識別該標(biāo)簽的抗體對其進(jìn)行鑒定與純化。整個反應(yīng)的原理是基于抗原 - 抗體反應(yīng)，標(biāo)簽抗體可以高度特異地結(jié)合對應(yīng)的標(biāo)簽融合蛋白。
融合標(biāo)簽可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括 Flag、His、myc、HA、GST、GFP 等。
標(biāo)簽抗體可用于檢測或純化表達(dá)載體上的標(biāo)簽序列，從而研究目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平與功能。標(biāo)簽抗體現(xiàn)在已經(jīng)成為基因表達(dá)和基因功能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等研究中的常用工具。
