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細(xì)胞功能檢測與分析
細(xì)胞功能檢測

全面了解細(xì)胞的功能對推進(jìn)細(xì)胞研究至關(guān)重要，通過揭示細(xì)胞行為的背后機(jī)制，可以對各種生物學(xué)過程了解得更加全面，為醫(yī)學(xué)、生物科學(xué)等領(lǐng)域的進(jìn)步開辟道路。細(xì)胞功能檢測包括細(xì)胞增殖與活力檢測、細(xì)胞凋亡檢測、細(xì)胞周期分析、細(xì)胞遷移與侵襲、細(xì)胞自噬檢測、細(xì)胞信號通路分析等多個方面。

細(xì)胞活力檢測方法

細(xì)胞功能檢測中有關(guān)細(xì)胞活力的檢測十分重要，其方法有多種，例如ATP生物發(fā)光法、LDH檢測法、MTT比色法、CCK-8法和細(xì)胞凋亡檢測法。

ATP生物發(fā)光法：生物體細(xì)胞內(nèi)最重要的能量來源是ATP，是衡量細(xì)胞新陳代謝水平的重要指標(biāo)。在同種細(xì)胞，近似的培養(yǎng)條件下，ATP的含量與活細(xì)胞數(shù)目具有良好的線性關(guān)系。即可通過ATP含量反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目。在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲熒光素酶能夠把熒光素催化成氧化熒光素，在氧化的過程中會發(fā)出波長為560nm左右的生物熒光。即該反應(yīng)為ATP依賴的發(fā)光反應(yīng)。其發(fā)光強(qiáng)度與ATP含量線性相關(guān)。

LDH檢測法：LDH在糖酵解中發(fā)揮著重要作用，可以將乳酸催化為丙酮酸，丙酮酸與2,4-二硝基苯肼的產(chǎn)物可以在堿性溶液中呈現(xiàn)棕紅色，顏色的深淺與丙酮酸的濃度成正比，可以用于檢測LDH的濃度。在細(xì)胞活力檢測中，用于判斷細(xì)胞膜完整程度。

MTT比色法：MTT是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

CCK-8法：CCK-8試劑中含有WST–8,它在電子載體的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物，生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

細(xì)胞凋亡檢測法：可以特異性地檢測細(xì)胞凋亡，如通過Annexin V染色結(jié)合凋亡細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸檢測細(xì)胞凋亡。


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全面了解細(xì)胞的功能對推進(jìn)細(xì)胞研究至關(guān)重要，通過揭示細(xì)胞行為的背后機(jī)制，可以對各種生物學(xué)過程了解得更加全面，為醫(yī)學(xué)、生物科學(xué)等領(lǐng)域的進(jìn)步開辟道路。細(xì)胞功能檢測包括細(xì)胞增殖與活力檢測、細(xì)胞凋亡檢測、細(xì)胞周期分析、細(xì)胞遷移與侵襲、細(xì)胞自噬檢測、細(xì)胞信號通路分析等多個方面。

細(xì)胞活力檢測方法

細(xì)胞功能檢測中有關(guān)細(xì)胞活力的檢測十分重要，其方法有多種，例如ATP生物發(fā)光法、LDH檢測法、MTT比色法、CCK-8法和細(xì)胞凋亡檢測法。

ATP生物發(fā)光法：生物體細(xì)胞內(nèi)最重要的能量來源是ATP，是衡量細(xì)胞新陳代謝水平的重要指標(biāo)。在同種細(xì)胞，近似的培養(yǎng)條件下，ATP的含量與活細(xì)胞數(shù)目具有良好的線性關(guān)系。即可通過ATP含量反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目。在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲熒光素酶能夠把熒光素催化成氧化熒光素，在氧化的過程中會發(fā)出波長為560nm左右的生物熒光。即該反應(yīng)為ATP依賴的發(fā)光反應(yīng)。其發(fā)光強(qiáng)度與ATP含量線性相關(guān)。

LDH檢測法：LDH在糖酵解中發(fā)揮著重要作用，可以將乳酸催化為丙酮酸，丙酮酸與2,4-二硝基苯肼的產(chǎn)物可以在堿性溶液中呈現(xiàn)棕紅色，顏色的深淺與丙酮酸的濃度成正比，可以用于檢測LDH的濃度。在細(xì)胞活力檢測中，用于判斷細(xì)胞膜完整程度。

MTT比色法：MTT是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

CCK-8法：CCK-8試劑中含有WST–8,它在電子載體的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物，生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

細(xì)胞凋亡檢測法：可以特異性地檢測細(xì)胞凋亡，如通過Annexin V染色結(jié)合凋亡細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸檢測細(xì)胞凋亡。
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