抗生素篩選預實驗
抗生素預實驗目的是確定抗生素的最佳濃度，同時確定抗生素對所選細胞的最低作用濃度，以便用于病毒感染后通過合適的抗生素濃度進行穩(wěn)定株構建。
實驗步驟（以 Puromycin 篩選為例）
| 1 | 細胞培養(yǎng)：取待測培養(yǎng)且狀態(tài)良好的細胞，制備成細胞懸液，按等量接種入 96 孔培養(yǎng)板中，待細胞生長至70~80%匯合度左右開始加藥。 |
| 2 | 加入 Puromycin 藥物進行空細胞致死最低濃度篩選，濃度范圍一般設置為：1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL 等。 *以上為終濃度，具體濃度設計可參考文獻中相關細胞常用濃度并設置梯度，一般設置7~8 個濃度點，并做2~3 復孔 |
| 3 | 藥物處理 72h 后細胞全部死亡的最低藥物濃度，即為后續(xù) Puromycin 抗性細胞的篩選濃度（全致死濃度），可通過不同濃度加藥細胞拍攝圖片分析，或酶標儀檢測 CCK8 數(shù)據(jù)分析，建立死亡曲線，確定最佳篩選濃度。 |
常見抗生素類型及濃度范圍推薦
嘌呤霉素鹽酸鹽Puro（首選） | 使用濃度 1~10μg/mL 作用時間 72 小時 |
殺稻瘟菌素S Blasticidin S （次選） | 使用濃度 5~50μg/mL 作用時間 72 小時 |
遺傳霉素G418 | 使用濃度 100μg/mL~1mg/mL 作用時間 10~14 天 |
潮霉素B Hygromycin B | 使用濃度 50-500 μg/mL 作用時間 7-10 天 |
抗生素篩選建立穩(wěn)轉(zhuǎn)株
帶有不同抗性的慢病毒在成功感染細胞后，能使細胞在含有一定濃度對應抗生素的培養(yǎng)基中存活，而未感染上慢病毒的細胞則無法存活。因此在抗性篩選壓力下，可成功篩選穩(wěn)定表達目的基因的細胞株。
如：帶有 Puromycin 抗性的慢病毒感染 48~72 小時后（70~80%匯合度），將細胞繼續(xù)培養(yǎng)于含適當濃度 Puromycin 的培養(yǎng)液中，每 3~4 天更換一次含抗生素的培養(yǎng)液，直至未感染病毒的對照組細胞被抗生素殺光，而感染病毒組再無細胞出現(xiàn)死亡（如病毒載體帶有熒光標記，熒光效率需達到 100%）后，進行混合克隆及單克隆穩(wěn)定株篩選。
注：篩選濃度即為抗生素預實驗確定該細胞的全致死濃度，篩選時可設置未感染病毒的野生型細胞作為對照，加入等量濃度抗生素。
吉滿抗生素產(chǎn)品
吉滿可提供不同規(guī)格的嘌呤霉素鹽酸鹽、殺稻瘟菌素S(滅瘟素)Blasticidin S、遺傳霉素G418 Sulfate、潮霉素B(hygromycin B)等抗生素可用于細胞實驗中的抗性篩選。點擊了解產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
嘌呤霉素鹽酸鹽Puromycin dihydrochloride | GM-040401 | 25mg/100mg/ 250mg/500mg/1g |
遺傳霉素G418 Sulfate(Geneticin) | GM-040402 | 1g/5g |
潮霉素B Hygromycin B | GM-040403 | 1g/10g |
殺稻瘟菌素S(滅瘟素)Blasticidin S | GM-040404 | 10mg/5*10mg |
鹽酸博萊霉素 | GM-040407 | 100mg/100mg*10 |
吉滿引文（部分）
| Feng J, Zhong H, Mei S, et al. LPS-induced monocarboxylate transporter-1 inhibition facilitates lactate accumulation triggering epithelial-mesenchymal transformation and pulmonary fibrosis[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2024, 81(1): 206. #GM-040401 |
| Lin Z, Liu Y, Xu T, et al. STAT3-Mediated Promoter-Enhancer Interaction Up-Regulates Inhibitor of DNA Binding 1 (ID1) to Promote Colon Cancer Progression[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2023, 24(12): 10041. #GM-040404 |
| Jia X, Xi J, Tian B, et al. The tautomerase activity of tumor exosomal MIF promotes pancreatic cancer progression by modulating MDSC differentiation[J]. Cancer Immunology Research, 2024, 12(1): 72-90. #GM-040403 |
