研究背景
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是慢性肝病最常見的病因之一，也是全球肝硬化和肝細胞癌的主要病因。起因于人們飲食和生活方式的改變，NAFLD的流行率以驚人的速度全球范圍內(nèi)流行，包括慢性乙型肝炎(CHB)流行的亞洲，因而在亞洲NAFLD和CHB同時發(fā)生成為一種較為常見的現(xiàn)象。然而脂肪肝發(fā)病在CHB預(yù)后中的發(fā)病機制尚未完全闡明，了解其潛在的分子機制將有助于識別有效的分子診斷標志物和治療靶點。
文獻來源
山東省立醫(yī)院楊紅麗所在課題組等人發(fā)表題為：ADAR1 Inhibits HBV DNA Replication via Regulating miR-122-5p in Palmitic Acid Treated HepG2.2.15 Cells的一文，探討了CHB并發(fā)NAFLD患者肝組織中ADAR1和miR-122的表達水平，通過棕櫚酸誘導(dǎo)乙肝合并脂肪肝細胞模型，明確了ADAR1通過調(diào)控miR-122抑制HBV DNA復(fù)制的分子機制。
項目研究
ADAR1是腺苷脫氨酶ADAR最常見的形式，已知參與各種病毒的復(fù)制。miR-122作為慢性乙肝肝臟損傷標志物，對HBV表達有抑制作用。因此作者大膽地假設(shè)ADAR1可能影響miR-122的表達，從而參與HBV DNA復(fù)制的調(diào)控。與CHB患者相比，CHB并發(fā)NAFLD患者肝組織中ADAR1蛋白和mRNA的表達均顯著下調(diào)，miR-122表達趨勢與此相同。HBeAg蛋白表達明顯升高，CHB并發(fā)NAFLD患者出現(xiàn)明顯的脂肪空泡。
（圖1 CHB并發(fā)NAFLD患者的肝臟中ADARl、miR-122的表達水平）
為探討病理狀態(tài)下CHB并發(fā)NAFLD的分子機制，我們采用棕櫚酸處理HepG2.2.15建立乙肝合并脂肪肝細胞模型，與對照組相比，誘導(dǎo)模型組的AST和ALT水平均顯著升高，HBV DNA、HBeAg濃度以及HBV DNA表達增加。同時，ADAR1表達和脂肪聚積與CHB合并NAFLD患者肝組織中的驗證結(jié)果保持一致。 （圖2 棕櫚酸處理的HepG2.2.15細胞中升高的HBV相關(guān)標志物） （圖3 ADARl在棕櫚酸處理的HepG2.2.15細胞中下調(diào)） 作者通過miR-122敲低/過表達分子操作，進一步評估了miR-122在棕櫚酸處理的HepG2.2.15細胞中對HBV DNA和HBeAg水平的影響，結(jié)果表明miR-122對HBV DNA復(fù)制起抑制作用。構(gòu)建ADAR 1過表達和shRNA慢病毒(Genomeditech)用于感染棕櫚酸處理的HepG2.2.15細胞，驗證發(fā)現(xiàn)miR-122與ADAR1之間呈正相關(guān)，ADARl的過表達能夠顯著抑制HBV DNA和HBeAg的表達，敲低后反之。也就是說，ADAR1負調(diào)控肝細胞中的HBV DNA水平，并且證實了這種抑制作用通過增加miR-122水平來實現(xiàn)。 （圖4 miR-122抑制棕櫚酸處理的HepG2.2.15細胞中的HBVDNA水平） （圖5 ADARl下調(diào)HBV DNA水平并增加miR-122表達） 具體分子機制如下： 吉滿助力 本研究中所用ADAR1過表達及shRNA慢病毒均由吉滿生物提供。 如想了解更多質(zhì)粒構(gòu)建,病毒包裝,穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建,敲除細胞株,報告基因檢測等相關(guān)服務(wù)。歡迎訪問吉滿生物官網(wǎng)：www.news.ytakw.cn 免費咨詢電話：400-627-9288
