眾所周知，ADC藥物由單克隆抗體（mAb），有效載物（Payload）和連接兩者的連接物（Linker）組成。在ADC設(shè)計研發(fā)過程中，首要的是藥物靶點的選擇，另一個重要因素是內(nèi)吞/內(nèi)化的效率。
ADC藥物通過靶向腫瘤細胞表面的抗原，并利用抗體介導(dǎo)的內(nèi)吞/內(nèi)化途徑將細胞毒素傳遞到腫瘤細胞內(nèi)部，從而實現(xiàn)對腫瘤細胞的殺傷作用。
抗體內(nèi)化
結(jié)合常規(guī)的ADC藥物內(nèi)化途徑，一般來說，內(nèi)化又稱為內(nèi)吞，正常的內(nèi)吞作用可分為三個階段：芽的形成、膜的彎曲和囊泡的成熟和膜的斷裂并釋放到細胞質(zhì)中。
ADC藥物內(nèi)化途徑可按是否依賴于網(wǎng)格蛋白細分
| 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用 | / |
| 非網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用 | 小窩介導(dǎo)的內(nèi)吞作用 |
| 小窩蛋白非依賴性載體蛋白/GPI-富集的早期內(nèi)區(qū)室（CLIC/GEEC） | |
| 巨胞飲作用 |
抗體能否被內(nèi)化主要由靶點決定，而抗體內(nèi)化的效率則與抗原密度、抗體親和力以及抗體與抗原結(jié)合表位密切相關(guān)。因此，抗體內(nèi)化效率對于ADC藥物的早期篩選至關(guān)重要，需要精準表征。
ADC抗體內(nèi)化效率體外檢測工具—DT3C
DT3C(DT-3C)蛋白廣泛用于檢測mAb內(nèi)化能力，尤其在ADC藥物的內(nèi)化效率檢測中。DT3C 是重組表達的融合蛋白，由白喉毒素的Fragment A (僅毒素部分)和G 群鏈球菌的3C片段(lgG 結(jié)合部分)融合而成。該蛋白能夠與抗體的Fc 端高度親和，與抗體結(jié)合的DT3C分子在抗體被內(nèi)吞時一同進入細胞，在胞內(nèi)弗林蛋白酶(furin protease)的作用下，釋放出具有毒性的DT，DT能夠抑制EF2-ADP 核糖基化的活性，阻斷蛋白翻譯過程，最終導(dǎo)致細胞死亡，而未進入細胞的DT3C 則不具有殺傷細胞的活性。因此可根據(jù)細胞殺傷情況來評價抗體的內(nèi)化效率。
用心做好細胞，為更好的靶向藥
吉滿生物重組DT3C 蛋白(Cat.GM-046001RP) 從大腸桿菌中(E.coli)表達，包含33-417aa(P00588) & 291-497aa (P19909)，8His標簽序列置于DT3C編碼序列的N端，純度≥90%(SDS-PAGE)，分子量69.4 kDa，溶解在pH7.4的PBS中，經(jīng)過0.2μm過濾膜除菌，內(nèi)毒素< 1EU/μg。點擊此處了解產(chǎn)品
| 制備簡單 |
| 在室溫下孵育30分鐘即可形成mAb-DT3C偶聯(lián)物 |
| 多物種適用 |
| 可與來自不同物種的任何IgG結(jié)合 |
| 檢測便捷 |
| 通過流式細胞術(shù)或熒光顯微鏡等方法，即可快速、準確地檢測mAb在細胞表面的內(nèi)化效率 |
| 內(nèi)化效率高 |
| 分子量小于Mab-ZAP，mAb-DT3C內(nèi)化效率高于mAb-Mab-ZAP |
產(chǎn)品列表
| 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 單位 |
| Recombinant DT3C Protein | GM-046001RP-1 | 100 μg | 管 |
| GM-046001RP-2 | 1 mg | 管 |
驗證結(jié)果
圖1 細胞內(nèi)化實驗（h12F3 mAb與 DT3C的摩爾比為1:6、細胞量3×103 Cells/孔）
圖2 經(jīng)SDS-PAGE驗證，吉滿DT3C蛋白純度高于90%
相關(guān)產(chǎn)品
除此以外，吉滿生物還可提供GMTiter試劑盒，配套DT3C蛋白產(chǎn)品，用于ADC藥物的內(nèi)化效率檢測。
| 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| GMTiter TM Luminescent Cell Viability Assay | GM-040504D | 10000T |
| GM-040504C | 1000T | |
| GM-040504B | 100T*10 | |
| GM-040504A | 100T |
