原理簡介
Cre-loxP系統(tǒng)是一種基因工程技術(shù)，利用 Cre 重組酶和 loxP 位點(diǎn)來對(duì)基因組進(jìn)行精確的修飾。
Cre 重組酶由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼，是由343個(gè)氨基酸組成的38kD的蛋白質(zhì)。它不僅具有催化活性，而且與限制酶相似，能夠識(shí)別并切割 loxP 位點(diǎn)。LoxP位點(diǎn)長為34bp，由兩個(gè)13bp的反向回文序列和8bp的中間間隔序列共同組成，反向回文序列是Cre重組酶的識(shí)別和結(jié)合區(qū)域，間隔序列決定LoxP序列的方向。
Cre重組酶介導(dǎo)兩個(gè)LoxP位點(diǎn)間的重組是一個(gè)動(dòng)態(tài)、可逆的過程，大致分成三種情況：
1、兩個(gè)loxP位點(diǎn)位于同一條DNA鏈上且方向相同，Cre重組酶敲除loxP間的序列
2、兩個(gè)loxP位點(diǎn)位于同一條DNA鏈上且方向相反，Cre重組酶誘導(dǎo)loxP間的序列翻轉(zhuǎn)
3、兩個(gè)loxP位點(diǎn)位于不同的DNA鏈或染色體上，Cre重組酶誘導(dǎo)兩條DNA鏈發(fā)生交換或染色體易位
圖1 Cre-lox系統(tǒng)介導(dǎo)的DNA重組機(jī)制（來源網(wǎng)絡(luò)）
Cre-Loxp AAV優(yōu)勢(shì)
Cre-Loxp AAV 利用AAV作為載體，將Cre重組酶遞送至目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)。Cre重組酶是一種DNA重組酶，能夠催化DNA分子上的重組事件，特別是在LoxP序列的兩個(gè)LoxP位點(diǎn)之間引發(fā)基因組的重組。通過將Cre重組酶與AAV結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)基因的特異性編輯和調(diào)控，從而實(shí)現(xiàn)基因功能研究和疾病模型的建立。
一、更強(qiáng)的區(qū)域特異性
由于病毒可以通過局部注射的方式保證區(qū)域特異性感染，再加上驅(qū)動(dòng)Cre基因的特異性啟動(dòng)子，能夠?qū)崿F(xiàn)更強(qiáng)的區(qū)域和細(xì)胞特異性的基因重組。
二、更少的花費(fèi)
購買轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的費(fèi)用一般是比較昂貴的，而且轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的飼養(yǎng)、基因型鑒定都需要不少的人力、物力，而病毒的制備、保存和注射所花的費(fèi)用相對(duì)來說是比較少的。
三、更短的實(shí)驗(yàn)周期
由于病毒能非常迅速的起作用，而轉(zhuǎn)基因小鼠的交配過程特別耗時(shí)間，因此采用注射病毒到轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的方式，可以大量縮短實(shí)驗(yàn)周期。
Cre-Loxp AAV應(yīng)用場景
場景一：構(gòu)建動(dòng)物模型
構(gòu)建條件性敲除/過表達(dá)小鼠模型通常是通過兩種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（一種帶Cre，一種帶loxP序列）進(jìn)行至少2代雜交獲得，耗時(shí)較長，成本較高。但使用腺相關(guān)病毒（AAV），通過Flox小鼠注射AAV-Cre或者Cre小鼠注射AAV-LoxP的方式，周期短，成本低，時(shí)空特異性表達(dá)，可以極大的提高轉(zhuǎn)基因小鼠模型的應(yīng)用效率。
圖2 TGFBI flox/flox小鼠注射AAV-Cre
（AAV8-mCD68-Cre）應(yīng)用案例
吉滿生物提供的Cre AAV可以靈活、高效地結(jié)合Gene-floxed小鼠實(shí)現(xiàn)條件性敲除，免去Cre小鼠維系及與Gene-floxed小鼠雜交環(huán)節(jié)。
場景二：神經(jīng)領(lǐng)域
在光遺傳、化學(xué)遺傳、鈣成像領(lǐng)域，利用CRE、FLP等技術(shù)，實(shí)現(xiàn)基因的條件可控性表達(dá)，如有CRE的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，可直接利用攜帶DREADD轉(zhuǎn)基因的DIO載體。
圖3 Cre依賴的化學(xué)遺傳激活案例
通過將AAV-Cre注入到特定腦區(qū)或神經(jīng)元群中，從而研究神經(jīng)回路在行為和認(rèn)知過程中的作用。
圖4 rAAV2-retro 和 Cre系統(tǒng)
介導(dǎo)皮層紋狀體神經(jīng)環(huán)路示蹤案例
吉滿生物提供的Cre-Loxp AAV可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定神經(jīng)回路的解剖和調(diào)控，從而探究其在不同行為、認(rèn)知和疾病中的作用。這為神經(jīng)回路水平的研究提供了重要工具和手段。
部分客戶引文
| Yu G, Liu P, Huang X, et al. 20-HETE mediated TRPV1 activation drives allokinesis via MrgprA3+ neurons in chronic dermatitis[J]. Theranostics, 2024, 14(4): 1615. |
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吉滿產(chǎn)品
吉滿可以為客戶提供基于Cre-LoxP系統(tǒng)的AAV病毒現(xiàn)貨產(chǎn)品和定制服務(wù)，以及其他重組酶系統(tǒng)病毒定制服務(wù)，比如與Cre-LoxP系統(tǒng)無交叉影響的vCre-vLoxP、sCre-sLoxP系統(tǒng)，及Flp-FRT/F5系統(tǒng)和Dre-Rox1/Rox2系統(tǒng)等。點(diǎn)擊了解產(chǎn)品
*其他啟動(dòng)子或有特殊需求，可做定制
