背景介紹
基因過表達(gene overexpression)是將目的基因編碼區(qū)序列(CDS)克隆到相應的質(zhì)粒或病毒載體上，利用載體骨架上構建的調(diào)控元件，使基因可以在人為的控制條件下實現(xiàn)大量轉錄和翻譯，從而實現(xiàn)目的基因的過表達。此外，還可以選擇報告基因進行示蹤或抗性基因進行篩選。
基因過表達研究應用
常用的基因表達載體有質(zhì)粒載體和病毒載體，病毒載體又包括：腺相關病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體和逆轉錄病毒載體等，廣泛應用于體外和體內(nèi)基因功能研究。
有哪些常見類型的過表達
一、常規(guī)蛋白表達
常規(guī)蛋白表達的同時可以為蛋白表達添加融合或非融合的熒光標簽，親和標簽，亞細胞定位系列等不同類型的修飾。
二、非編碼RNA表達
與常規(guī)蛋白表達不同的是，由于非編碼RNA(鏈接非編碼RNA介紹)僅僅轉錄但不翻譯，無蛋白產(chǎn)生，因此此類表達載體(尤其是lncRNA)最好獨立表達熒光蛋白，且常規(guī)蛋白表達的修飾基本不能使用。目前常見的非編碼RNA主要為microRNA、lncRNA、circRNA三大類，表達載體與之對應。
【吉滿生物】基因過表達工具介紹（上）
一、質(zhì)粒載體 點擊了解產(chǎn)品
在生物醫(yī)學領域，利用常規(guī)轉染將質(zhì)粒載體轉到動物細胞中仍然被大多數(shù)實驗室使用。主要因為常規(guī)質(zhì)?；虮磉_載體在技術上的簡便性以及在各類細胞中的高效轉染率。
載體特點
①過程較簡單：相比病毒載體要進行病毒包裝，常規(guī)質(zhì)粒載體通過常規(guī)轉染即可把質(zhì)粒轉入細胞；
②載體容量大：有足夠大的容量可以放置用戶所感興趣的序列；
③表達水平高：可以產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù)，使外源基因能高水平的表達，但不同細胞類型拷貝數(shù)也有差異；
④表達時間短：瞬時轉染，在細胞里以游離DNA的狀態(tài)存在，表達時間持續(xù)3-7天；
⑤轉染差異大：不同類型的細胞質(zhì)粒轉染效率差異較大，非分裂細胞比分裂細胞難轉染，原代細胞比永生化細胞難轉染。
吉滿服務
吉滿生物擁有豐富的質(zhì)粒構建經(jīng)驗，能為客戶提供高拷貝復制能力且對細胞具有高效轉染率的質(zhì)粒載體，同時可根據(jù)客戶需求對轉染了該載體的細胞進行篩選和可視化追蹤。點擊了解產(chǎn)品
二、慢病毒載體 點擊了解產(chǎn)品
慢病毒載體來源于人類免疫缺陷病毒HIV，屬于逆轉錄病毒家族。由于具有目的基因和啟動子選擇的靈活性以及轉染細胞類型的廣泛性，使得慢病毒載體系統(tǒng)成為倍受歡迎的外源基因表達系統(tǒng)。
慢病毒重組載體構建完成后需要輔助質(zhì)粒的參與才能包裝形成病毒顆粒。通過對上清液中活體病毒的直接收集或進一步濃縮病毒后可用于轉染靶細胞，釋放到宿主細胞中的病毒RNA逆轉錄成雙鏈DNA，進一步整合到宿主細胞的基因組中。
載體特點
①感染譜廣：可有效感染腫瘤細胞、神經(jīng)元、心肌細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型細胞；
②穩(wěn)定表達：通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上，可實現(xiàn)目的基因長期穩(wěn)定表達，不隨細胞分裂傳代而丟失；
③安全性高：未發(fā)現(xiàn)致病性，已被用于CAR-T治療作用于人體；
④免疫原性低：體內(nèi)注射不會引起明顯的免疫反應，適用于動物實驗；
⑤包裝容量有限：插入的外源基因需在4kb以下；
⑥包裝滴度較低：相比腺病毒與腺相關病毒，慢病毒包裝滴度稍低。
吉滿服務流程
吉滿生物專注病毒包裝，擁有非常豐富的慢病毒包裝經(jīng)驗，能對大多數(shù)宿主細胞具有高效的轉導能力，能有效的把載體整合到靶細胞基因組，并實現(xiàn)外源基因的高水平表達。
三、腺相關病毒載體 點擊了解產(chǎn)品
腺相關病毒(adeno-associated virus, AAV)是一類無法自主復制的二十面體微小病毒。通常情況下，只有在輔助病毒的參與下，才能進行復制。
腺相關病毒(AAV)載體系統(tǒng)是對腺相關病毒進行優(yōu)化的一種基因傳遞系統(tǒng)。AAV重組載體構建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉染進入包裝細胞，包裝成病毒顆粒。純化后，轉導進入宿主細胞，線性雙鏈DNA基因組以游離DNA的形式存在于細胞核中。輔助質(zhì)粒能夠代替輔助病毒，幫助AAV實現(xiàn)自我復制，從而提高載體系統(tǒng)的生物安全性。
載體特點
①特異性好：AAV血清型種類繁多，不同血清型在感染時具有不同的組織器官偏好性，實現(xiàn)感染特異性；
②擴散性強：AAV體積小、滴度高，因此具有遠高于腺病毒和慢病毒的擴散性，能夠大面積感染組織；
③安全性高：目前已經(jīng)有多項基于AAV載體的治療藥物被應用于臨床，表現(xiàn)出很高的安全性；
④免疫原性低：重組AAV不帶有病毒功能及結構蛋白，用于基因治療基本不引起免疫反應；
⑤局限性：適合在體實驗，體外實驗轉染效率較低；外源基因需較長時間開始表達；載體容量小，目前最多容納5kb外源DNA。
吉滿服務流程
吉滿生物的AAV載體經(jīng)過優(yōu)化后，是一個包裝病毒滴度高，細胞轉導效率高，轉基因水平表達高的載體系統(tǒng)，具有極高的生物安全性，同時可以根據(jù)客戶需求使用不同的衣殼蛋白包裝病毒，賦予病毒不同的血清型。
