背景介紹
基因過表達(gene overexpression)是將目的基因編碼區(qū)序列(CDS)克隆到相應(yīng)的質(zhì)?；虿《据d體上，利用載體骨架上構(gòu)建的調(diào)控元件，使基因可以在人為的控制條件下實現(xiàn)大量轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而實現(xiàn)目的基因的過表達。此外，還可以選擇報告基因進行示蹤或抗性基因進行篩選。
基因過表達研究應(yīng)用
常用的基因表達載體有質(zhì)粒載體和病毒載體，病毒載體又包括：腺相關(guān)病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等，廣泛應(yīng)用于體外和體內(nèi)基因功能研究。
上篇為大家介紹了質(zhì)粒載體、慢病毒載體、腺相關(guān)病毒載體三類基因過表達工具，詳情可點擊基因過表達工具介紹(上)查看，今天繼續(xù)為大家介紹其他三種工具，一起往下看吧~
【吉滿生物】基因過表達工具介紹（下）
四、PiggyBac轉(zhuǎn)座載體
PiggyBac屬于II類轉(zhuǎn)座子，通過“剪切-粘貼”機制移動，即從基因組一個位置轉(zhuǎn)座到另一個位置，不留下序列本身(與I類啟動子通過“復(fù)制-粘貼”的移動方式不同)，是目前轉(zhuǎn)基因研究中應(yīng)用最廣泛的工具之一。
PiggyBac轉(zhuǎn)座子可利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(非病毒轉(zhuǎn)導(dǎo))把感興趣的基因長期穩(wěn)定地整合到靶細胞基因組。具有安全、高效、負載容量大的優(yōu)點，且相對于一般載體，其插入位點為TTAA，因此具有比較高的特異性。piggyBac轉(zhuǎn)座系統(tǒng)不僅可作為哺乳動物及培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)基因工具，也是一種潛在的非病毒類基因治療載體。
PiggyBac系統(tǒng)包含兩個載體：一個載體被稱為輔助質(zhì)粒，負責編碼轉(zhuǎn)座酶；另一個載體被稱為轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒，包含兩個末端重復(fù)序列(TRs)以及兩者之間的被轉(zhuǎn)座區(qū)域。
載體特點
①安全性高、操作方便(可直接用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞）
②體載容量大(10kb-20kb)，可實現(xiàn)多基因的共表達
③轉(zhuǎn)基因可長期穩(wěn)定地表達，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒的比例，提高外源基因的整合效率
④易于確定整合位點，通過反向PCR精確確定目的基因插入的位置
⑤不同類型細胞轉(zhuǎn)染效率差異較大
吉滿服務(wù)
吉滿生物的PiggyBac轉(zhuǎn)座子載體與輔助質(zhì)粒經(jīng)過優(yōu)化后，可在大腸桿菌中高拷貝復(fù)制。該載體系統(tǒng)對多種類型的靶細胞均具有高效的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，實現(xiàn)外源基因的高水平表達。
五、Tet-On誘導(dǎo)表達慢病毒載體
Tet-On誘導(dǎo)表達系統(tǒng)是調(diào)控目的基因定時表達的強大工具，Tet-On誘導(dǎo)表達載體在沒有四環(huán)素或其他類似物(doxycycline)存在時，目的基因幾乎不表達；當添加四環(huán)素/Dox時，目的基因得以快速高水平表達。Tet-on表達調(diào)控系統(tǒng)是當前應(yīng)用更為廣泛的四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)！
載體特點
①精準調(diào)控：Tet-On表達載體可嚴格調(diào)控基因的表達，藥物劑量及用藥時間可控，在沒有誘導(dǎo)劑的情況下可將背景泄露最小化，并保持該系統(tǒng)對四環(huán)素誘導(dǎo)的高靈敏度；
②表達量高：TRE啟動子可驅(qū)動GOI在誘導(dǎo)狀態(tài)下高水平表達；
③安全性好：四環(huán)素及其衍生物應(yīng)用多年，安全可靠；低劑量即可獲得良好的效果。
吉滿服務(wù)
吉滿生物能為客戶提供Tet-on表達調(diào)控載體，并能根據(jù)客戶需要包裝成Tet-On慢病毒。
六、CRISPRa（轉(zhuǎn)錄激活）
CRISPR-Cas9系統(tǒng)是目前被廣泛運用的基因編輯系統(tǒng)，其原理是由sgRNA介導(dǎo)Cas9核酸酶靶向目標序列，對序列進行切割。Cas9核酸酶剪切活性取決于兩個結(jié)構(gòu)域：RuvC和HNH。當這兩個結(jié)構(gòu)域同時處于失活狀態(tài)時，Cas9將不具有核酸酶活性，成為dCas9(dead Cas9)。
CRISPRa(基因激活)系統(tǒng)是用于激活內(nèi)源性基因轉(zhuǎn)錄的強大工具，切割失活的dCas9連上轉(zhuǎn)錄激活因子(如VP64、p65和HSF1)，可以有效促進基因組特定位點的轉(zhuǎn)錄。研究表明，三種基于CRISPR-dCas9的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)(VPR, SAM和SunTag)在動物細胞中也能提高目的基因表達，并且效果更好，應(yīng)用更廣泛。
載體特點
①操作簡易：僅需dCas9核酸酶、sgRNA和轉(zhuǎn)錄激活因子(如VP64)，即可調(diào)控目的基因的轉(zhuǎn)錄水平；
②調(diào)控可逆：與常規(guī)轉(zhuǎn)基因技術(shù)相比，不需導(dǎo)入外源DNA，不會永久性的修飾基因組DNA；
③強烈激活：轉(zhuǎn)錄激活的基因通常得到非常高水平的表達；
④適用廣譜：無物種限制、無細胞種類限制。
吉滿服務(wù)流程
