研究背景
腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤,約占腎癌的90%。腎透明細(xì)胞癌 (ccRCC)是RCC的主要病理亞型，約占RCC的 70%。ccRCC起病隱匿，早期缺乏特異性臨床癥狀，易被誤診。目前，ccRCC的治療主要以手術(shù)結(jié)合靶向藥物為主。然而，早期診斷的困難、靶向藥物的耐受性和患者生存率的巨大波動(dòng)是對(duì)抗ccRCC的挑戰(zhàn). 因此，研究ccRCC的發(fā)病機(jī)制，探索針對(duì)ccRCC患者的新治療方法，成為當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)。
文獻(xiàn)來(lái)源
近日，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院泌尿外科章小平課題組等人在Cancer Communications發(fā)表研究性論文“N6-methyladenosine-modified DBT alleviates lipid accumulation and inhibits tumor progression in clear cell renal cell carcinoma through the ANXA2/YAP axis-regulated Hippo pathway”，研究發(fā)現(xiàn)，DBT被證實(shí)是具有顯著預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值的Hippo相關(guān)標(biāo)志物，其下調(diào)是由ccRCC 中的甲基轉(zhuǎn)移酶樣3(METTL3)介導(dǎo)的N6-甲基腺苷 (m6A)修飾引起的。功能研究表明DBT作為一種腫瘤抑制因子，可抑制腫瘤進(jìn)展和糾正ccRCC中的脂質(zhì)代謝紊亂。機(jī)制研究上膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)與DBT的硫辛酰結(jié)合域相互作用，激活Hippo信號(hào)，導(dǎo)致 yes1相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(YAP)的核定位降低和脂肪生成基因的轉(zhuǎn)錄抑制。
DBT在ccRCC中下調(diào)提示預(yù)后不良
首先，通過(guò)高通量測(cè)序數(shù)據(jù)顯示ccRCC與鄰近組織相比，Hippo通路中相關(guān)基因表達(dá)具有差異，進(jìn)一步篩選結(jié)合臨床數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)DBT在ccRCC中下調(diào)，是ccRCC不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。
（Fig.1 DBT在ccRCC中下調(diào)提示預(yù)后不良)
METTL3通過(guò)DBT的3‘UTR中的1672位點(diǎn)介導(dǎo)的m6A甲基化降低ccRCC中DBT的表達(dá)
其次，假設(shè)DBT的mRNA被m6A調(diào)控因子修飾，如甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物。MeRIP-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，m6A修飾的DBT在A498和CAKI-1細(xì)胞中的富集程度高于HEK293細(xì)胞。結(jié)合生信預(yù)測(cè)和雙熒光素酶檢測(cè)研究DBT與METTL3的互作，證明了METTL3通過(guò)DBT的3‘UTR中的1672 位點(diǎn)介導(dǎo)的m6A甲基化降低ccRCC中DBT的表達(dá)。
(Fig.2 METTL3介導(dǎo)的m6A修飾參與DBT下調(diào))
DBT在ccRCC中發(fā)揮抑癌作用
體內(nèi)外功能研究中，過(guò)表達(dá)DBT會(huì)抑制ccRCC的增殖，遷移和侵襲能力，并顯著抑制了腫瘤的轉(zhuǎn)移，減少了肝臟中轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)量，表明DBT在ccRCC 中發(fā)揮抑癌作用；
(Fig.3 DBT在體外和體內(nèi)抑制了ccRCC的進(jìn)展)
DBT是ccRCC脂質(zhì)積累的調(diào)節(jié)因子
由于ccRCC最突出的生物學(xué)特征是細(xì)胞內(nèi)脂滴積累，因此本研究通過(guò)敲低DBT和過(guò)表達(dá)DBT研究對(duì)脂質(zhì)代謝的調(diào)控，研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)DBT后細(xì)胞中脂質(zhì)積累減少，敲低DBT則相反。在油紅染色和脂質(zhì)相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果與此一致，以上證明DBT是ccRCC脂質(zhì)積累的調(diào)節(jié)因子。
(Fig.4 DBT 減少了ccRCC中的脂質(zhì)積累)
Fig.5 DBT激活Hippo信號(hào)以抑制YAP的轉(zhuǎn)錄活性
DBT對(duì)ccRCC中Hippo通路是否有影響，作者檢測(cè)了 Hippo通路核心組分的RNA水平，結(jié)果表明DBT過(guò)表達(dá)細(xì)胞中磷酸化的YAP有所增加，并抑制了YAP的核定位，脂質(zhì)通路相關(guān)基因的表達(dá)降低。敲低細(xì)胞模型與之相反。證實(shí)DBT激活了Hippo通路，進(jìn)而抑制了ccRCC中的脂質(zhì)積累和腫瘤進(jìn)展。
(Fig.5 DBT激活Hippo信號(hào)以抑制YAP的轉(zhuǎn)錄活性)
DBT通過(guò)與ANXA2發(fā)生直接相互作用，調(diào)節(jié)Hippo通路并抑制癌癥進(jìn)展和脂質(zhì)積累
為了進(jìn)一步確定DBT如何調(diào)節(jié)Hippo信號(hào)，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)分析及免疫沉淀實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)DBT通過(guò)與ANXA2發(fā)生直接相互作用，調(diào)節(jié)Hippo通路并抑制癌癥進(jìn)展和脂質(zhì)積累；
(Fig.6 DBT通過(guò)與ANXA2相互作用來(lái)調(diào)節(jié)Hippo信號(hào))
DBT-ANXA2-YAP軸在體內(nèi)抑制腫瘤進(jìn)展和脂質(zhì)積累
最后通過(guò)皮下腫瘤模型和轉(zhuǎn)移性腫瘤模型在體內(nèi)研究了DBT-ANXA2-YAP軸的功能，DBT過(guò)表達(dá)產(chǎn)生了有效的腫瘤生長(zhǎng)抑制，而ANXA2的敲低可以逆轉(zhuǎn)由 DBT過(guò)表達(dá)引起的生長(zhǎng)抑制，之后對(duì)脂質(zhì)通路的相關(guān)基因進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)DBT-ANXA2-YAP軸抑制了腫瘤進(jìn)展并抑制了ccRCC中的脂質(zhì)積累。
(Fig.7 DBT-ANXA2-YAP軸在體內(nèi)抑制腫瘤進(jìn)展和脂質(zhì)積累)
綜上所述，該研究表明DBT通過(guò)與ANXA2相互作用來(lái)調(diào)節(jié)Hippo通路，ANXA2引導(dǎo)YAP被磷酸化抑制。由METTL3介導(dǎo)的m6A 修飾誘導(dǎo)的DBT異常下調(diào)通過(guò)增加YAP的核定位促進(jìn)ccRCC的進(jìn)展和脂質(zhì)積累。因此，本研究揭示了調(diào)節(jié)ccRCC 中YAP活性和脂質(zhì)代謝的重要調(diào)節(jié)機(jī)制，并為開(kāi)發(fā)針對(duì)YAP或DBT m6A修飾的ccRCC治療策略提供了理論指引。
（Fig.8 ccRCC中DBT的機(jī)制方案）
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